10.3969/j.issn.1005-9369.2012.12.008
稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立
根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒.再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达.结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7 RNA聚合酶.结果显示,成功建立能稳定表达T7 RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础.
T7RNA聚合酶、EGFP和RED荧光基因、猪睾丸细胞、ST/T7RNA细胞系
Q503;S828(一般性问题)
2013-03-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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