稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立

摘要：

根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒.再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达.结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7 RNA聚合酶.结果显示,成功建立能稳定表达T7 RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础.

关键词：T7RNA聚合酶、EGFP和RED荧光基因、猪睾丸细胞、ST/T7RNA细胞系

分类号：Q503;S828(一般性问题)

在线出版日期：2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：26-31