昆虫细胞表达免出血症VP60蛋白间接ELISA方法建立及评价

摘要：

采用Bac-to-Bac系统表达的兔出血症病毒(RHDV)结构蛋白VP60作为包被抗原,建立抗体检测间接ELISA方法,并对方法性能进行测定.试验以整合有VP60基因的重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,感染细胞经裂解、离心初步纯化,作为包被抗原建立了检测RHD抗体的间接ELISA方法.经过对反应条件和试剂的优化选择,初步组装成间接ELISA试荆盒,并对其整体性能进行了评价.结果表明,含重组VP60蛋白的Sf9细胞裂解液最适包被稀释度为1:2 000,换算为纯化VP60蛋白舍量约为1.7 μg·mL-1;待检血清最适稀释度为1:100;羊抗免IgG HRP标记抗体最适使用浓度为1:30 000.初步组装的ELISA试剂盒检测RHD阴性血清无假阳性反应,与其他常见免病阳性血清无交叉反应,特异性良好;敏感性高于RHDV全病毒间接ELISA和血凝抑制试验,低于进口间接ELISA试剂盒;试剂盒批内和批间变异率在10%以内.37℃加速破坏试验和4℃保存期试验结果表明试剂盒保存期可以稳定在6个月.该方法可应用于兔出血症抗体水平监测及实验兔等级检测中.

关键词：兔出血症病毒、VP60基因、昆虫细胞、间接ELISA

所属期刊栏目：41

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：黑龙江省博士后资金项目

在线出版日期：2010-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：81-88