谷胱甘肽-S-转移酶-ASPP2融合蛋白的原核表达及纯化

摘要：

为表达并初步纯化包含ASPP2活性区域和不包含其活性区域的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-ASPP2融合蛋白.采用PCR扩增两段ASPP2基因短片段,在引物5'端和3'端分别引入Bam HI和Eco R I酶切位点,将其克隆进入原核表达栽体pGEX-4T-1;异丙基硫代一半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-ASPP2在大肠杆菌BL21(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-ASPP2融合蛋白;通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-ASPP2融合蛋白的表达.结果表明,已成功的构建了GST-ASPP2小片段融合蛋白表达载体,在Westem b10t分析中,4个蛋白条带均能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-ASPP2的分子质量相符.构建了GST-ASPP2重组质粒,在大肠杆茵BL21中高效表达GST-ASPP2融合蛋白,为进一步研究ASPP2全长,N-末端和C-末端生理意义奠定了基础.

关键词：ASPP2、谷胱甘肽-S-转移酶、融合蛋白、Western blot

所属期刊栏目：40

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30770742;北京市自然科学基金7092045;首都医学发展科研基金207-2050

在线出版日期：2010-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：65-68