SCMRP基因原核表达及多克隆抗体制备

摘要：

SCMRP基因是根据大豆密码子偏向性,采用生物信息学方法对玉米胚乳蛋白基因(MRZP)进行改造并合成的新基因,是适合在大豆中高效表达的高含硫氨基酸基因,可用于豆科作物的品质改良.将新合成的SCMRP基因构建到含有6xHis标签序列的原核表达载体pET-32b上,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,SDS-PAGE和Western blot分析表明:经IPTG诱导,转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株中能正常表达出约20 ku的目标蛋白质,IPTG最佳诱导表达时间是6 h.融合蛋白质以可溶组分形式存在.菌体总蛋白经金属鳌合层析纯化后免疫新西兰大耳兔,制备兔抗血清,经Western blot和琼脂板双向扩散试验表明,已纯化出SCMRP-6xHis融合蛋白质,成功制备出SCMRP兔多克隆抗体,抗血清效价达到1:256.上述结果表明,新合成的SCMRP基因是能够在生物体中正常表达的完整基因,制备的SCMRP兔多克隆抗体可用于转SCMRP基因植物蛋白质表达分析.研究结果将为通过转基因技术改良豆科植物含硫氨基酸品质奠定重要基础.

关键词：SCMRP、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：40

分类号：Q943.2(植物学)

资助基金：国家"863"计划项目2008AA10Z153;国家转基因植物研究与产业化专项JY04-A-01;国家自然科学基金30370909;黑龙江省教育厅项目10541018

在线出版日期：2009-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：60-65