小贯小绿叶蝉半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

摘要：

半胱氨酸蛋白酶是植食性昆虫体不可或缺的重要水解蛋白酶之一.本文从小贯小绿叶蝉的转录组数据库中获得半胱氨酸蛋白酶基因Eocyp的基因片段的转录本序列,利用RACE技术得到其cDNA全长序列,利用生物信息学技术对Eocyp所编码的理论氨基酸序列进行分析,使用qRT-PCR技术检测Eocyp在小贯小绿叶蝉不同发育阶段,雌、雄成虫不同部位以及不同温度和光周期下的表达量.结果表明,小贯小绿叶蝉Eocyp的全长cDNA序列包含一个1656 bp的开放阅读框,编码551个氨基酸,并具有由24个氨基酸残基组成的信号肽.推测其相对分子量为62.09 kD,预测其分子式为C2782H4163N737O835S25;理论等电点为6.02,不稳定系数为36.10.Eocyp具有半胱氨酸蛋白酶基因的典型特征,即催化三联体Cys357-His499-Asn519,同时具有ERFNIN,GNFD和GCDGG簇等保守结构域.Eocyp编码氨基酸序列与茶翅蝽CYP基因编码序列相似度最高.表达特征分析结果表明,Eocyp在小贯小绿叶蝉的各个生长时期均有表达,在5龄若虫时期达到最高;Eocyp在小贯小绿叶蝉雌、雄成虫的腹部均有较高的表达量;然而,Eocyp的表达量对于高、低温和不同光周期均无响应.这些结果为进一步研究Eocyp功能提供了理论依据.

关键词：小贯小绿叶蝉、半胱氨酸蛋白酶、克隆、表达

所属期刊栏目：38

分类号：S435.711;Q52(病虫害及其防治)

资助基金：公益性行业农业科研专项经费201403030;国家自然科学基金项目资助31772180;浙江省"151"人才工程资助项目

在线出版日期：2018-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：263-270