茶树简化EcoTILLING技术的建立

摘要：

EcoTILLING(Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)可快速检测自然群体中的SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等DNA变异.第一次建立了简化的茶树EcoTILLING技术体系:首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物;然后通过CELⅠ酶切PCR产物优化实验,确定酶切时间20 min、10×buffer组成为250 mmol/L Tris-HCl(pH7.4)、150 mmol/L KCl、15 mmol/L MgSO_4、4 μg/mL BSA和0.04% Triton x-100,反应温度为47.5℃,酶量为1.8 μL CJE(Celery Juice Extract)/10 μL反应体系时,酶切的谱带信号较强、特异性高;初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5%、上样量4～5 (L、有效分离长度要达到15 cm.利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870 bp的PPO基因片段实现了分型,经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合.

关键词：茶树、CELⅠ、EcoTILLING、SNP

所属期刊栏目：30

分类号：S571.1;Q55

资助基金：国家"863"计划2006AA10Z171;国家自然科学基金30901159;"现代农业茶叶产业技术体系建设专项资金"、"十一五"国家科技支撑计划2006BAD13B06;公益性行业农业科研专项3-35-02;浙江省自然科学基金Y3090041

在线出版日期：2010-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：19-26