茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析

摘要：

报道了国内第一个茶树cDNA文库的构建及其EST测序成功率分析.以Trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA,分离纯化富含Poly(A)的mRNA,LD-PCR反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建了龙井43新梢cDNA文库.以XLl-Blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×105 pfu/ml,总克隆数为3.5×105个,重组率为98.05%,扩增后文库总滴度为7.2×109 pfu/ml.对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,表明插入片段大多分布在0.5-2.0kb之间,绝大部分在1.0-1.5kb左右.文库质量鉴定结果表明,构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.对4320个克隆的序列测定表明,获得有用序列2963个,测序成功率为68.5%,剔除短序列后,首批共获得1687个茶树ESTs.

关键词：茶学、茶树[Camellia sinensis(L.)O.Kuntze]、新梢、mRNA、cDNA文库、EST、测序

所属期刊栏目：24

分类号：S571.1;Q523

资助基金：国家自然科学基金30070486;浙江省分析测试基金02032;浙江省留学回国人员基金

在线出版日期：2004-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：18-22