不对称还原制备光学纯(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的双酶共表达重组菌的构建

摘要：

克隆了来自于枯草芽孢杆菌的羰基还原酶基因IolS和葡萄糖脱氢酶基因GDH,采用Ni-NTA镍亲和层析柱对重组蛋白IolS进行纯化,并对纯酶进行了酶学性质研究.结果表明,该羰基还原酶的最适温度和pH值分别为30℃和6.0；在40℃以下具有较好的热稳定性；在pH 5.5-7.0的偏酸性范围内能保持75％以上的酶活.采用三种策略构建了IolS和GDH的共表达重组质粒,结果发现,采用双启动子的重组质粒能够实现羰基还原酶IolS的高效表达,粗酶液中的IolS和GDH的比酶活均达到1.5 U/mg.运用该重组菌对10 g/L的OPBE进行不对称还原,反应15h后,底物转化率大于99％,产物(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的ee值达到99.5％.

关键词：羰基还原酶、葡萄糖脱氢酶、共表达、(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯、不对称还原

所属期刊栏目：33

分类号：O643(物理化学（理论化学）、化学物理学)

资助基金：基金来源:国家重点基础研究发展计划973计划,2011CB710800;新世纪优秀人才支持计划NCET-11-0658;江苏省自然科学基金BK2011150;高等学校学科创新引智计划111计划,111-2-06;江苏高校优势学科建设工程

在线出版日期：2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1650-1660