P62-ASC泛素化介导自噬对NLRP3炎症小体调节的机制研究

摘要：

目的 探讨棕榈酸(PA)刺激下P62介导的自噬和含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体相互作用机制.方法 分离培养小鼠Kupffer细胞(KCs),分对照组、PA组、渥曼青霉素组和雷帕霉素组.Western blot测定各组KCs中LC3、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)及Beclin-1表达水平的变化,激光共聚焦显微镜观察P62与ASC,以及P62与LC3在细胞中的共定位情况;免疫共沉淀技术测定PA刺激前后P62与ASC、LC3之间的相互作用;Western blot测定PA处理12 h前后ASC泛素化改变情况.结果 与对照组比较,PA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、NLRP3、ASC、caspase-1和Beclin-1表达水平明显升高(P<0.05).而渥曼青霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组下降,NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组增加(P<0.05);雷帕霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组增加,而NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组减少(P<0.05).激光共聚焦结果显示KCs中P62与ASC、P62与LC3共定位,且在PA处理24 h后明显增强.免疫共沉淀结果表明,与对照组比较,PA组P62、ASC形成的共聚体明显增多.Western blot检测结果表明,PA组ASC泛素化水平较对照组增强.结论 KCs在PA刺激下,自噬与NLRP3炎症小体的表达均增强,且促进自噬能降低NLRP3炎症小体的表达,对KCs具有保护作用.P62对ASC泛素蛋白的识别在自噬对NL-RP3炎症小体的调节中非常关键.

关键词：自噬、泛素化、NLR家族、热蛋白结构域包含蛋白3、原癌基因蛋白质c-myc

所属期刊栏目：50

分类号：R575.5(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金项目;重庆市卫生和计划生育委员会医学科研计划项目

在线出版日期：2021-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：541-546