人源CerS2重组腺病毒构建及其对肝癌细胞HepG2细胞周期的作用

摘要：

目的 探讨神经酰胺合酶2(CerS2)过表达对肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及可能机制.方法 化学合成人源CerS2基因CDS区并构建重组穿梭质粒pDC315-CerS2-绿色荧光蛋白(GFP),采用Admax系统将成功构建的CerS2重组穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞,通过Cre/loxP实现重组,并进行扩增、纯化及滴度测定.将正确构建的Adv-CerS2-GFP重组腺病毒与空载分别感染肝癌细胞HepG2(即对照组、空载组、实验组),激光共聚焦显微镜定位CerS2-GFP融合蛋白的表达,流式细胞术PI法检测各组细胞周期的分布;RT-qPCR、Western blot法检测各组细胞CerS2、p27mRNA及蛋白表达水平.结果 经测序分析验证重组腺病毒构建成功.HepG2实验组CerS2、p27mRNA、蛋白相对表达水平较对照组、空载组明显增加(P＜0.01).对照组与空载组细胞周期时相分布差异无统计学意义(P＞0.05),实验组细胞较对照组、空载组G0/G1期百分比明显增加(P＜0.01);G2/M、S期明显减少(P＜0.01).结论 成功构建人源CerS2重组腺病毒且过表达的CerS2导致肝癌细胞HepG2细胞周期G0/G1期阻滞,其机制可能是通过上调p27从而抑制肝癌细胞的生长与增殖.

关键词：神经酰胺合酶、重组腺病毒、细胞周期、p27、激光扫描共聚焦显微镜

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分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：贵州省科学技术基金资助项目[黔科合基础20161174;黔科合J字LKZ201132;遵市科合社字201120号]

在线出版日期：2018-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3978-3981,3986