大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定

摘要：

目的 构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率.方法 针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对.利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率.结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)％和(67.27±2.94)％.结论 本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高.

关键词：瞬时感受器电位C离子通道4、shRNA、重组腺病毒载体、内皮祖细胞

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分类号：R363(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81360034,81560056;贵州省留学人员科技活动择优资助项目黔人项目资助合同20180003号

在线出版日期：2018-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2709-2713