uPA-siRNA重组慢病毒载体感染兔软骨细胞对uPA和MMP-3表达的影响

摘要：

目的：靶向特异尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）‐siRNA慢病毒表达载体并加载绿色荧光蛋白（GFP）后转染软骨细胞，观察其对软骨细胞表达uPA和基质金属蛋白酶3（MMP‐3）的影响。方法培养软骨细胞并根据实验分为实验组（转染uPA‐siRNA慢病毒载体）、空载体组（转染空慢病毒载体）、空白对照组（未进行任何处理）和 TIMP组（加载 MMP特异性抑制剂TIMP）。实验组：uPA‐siRNA序列经慢病毒包装并加载GFP ，通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞；空载体组：将慢病毒载体通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞；空白对照组正常培养软骨细胞；药物对照组：培养基中加特异性M M P抑制剂。所有细胞培养96 h后应用逆转录‐聚合酶链反应（RT‐PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）法分别检测软骨细胞uPA mRNA、MMP‐3 mRNA和蛋白的表达水平。结果慢病毒载体可成功转染到原代软骨细胞中，在感染复数（MOI）为100时转染率达到85％以上。实验组uPA mRNA、uPA蛋白和MMP‐3 mRNA及MMP‐3蛋白的表达水平显著低于空载体组和空白对照组（P＜0．01），而与药物干预组差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 uPA‐siRNA慢病毒载体负载GFP可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因、蛋白表达，同时对M M P‐3基因、蛋白表达也呈现高效抑制作用。抑制uPA的水平可降低显著M M P‐3表达。

关键词：RNA、小分子干扰、慢病毒载体、软骨细胞、尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶3

分类号：S85;R37

资助基金：国家自然科学基金资助项目30960387，81260453；兵团医药卫生专项基金2013BA020；兵团国际交流合作基金2011BC004，2012BC002。

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1892-1895