突变型DNA聚合酶β真核表达载体的构建及其表达

摘要：

目的 构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因(DNA polymerase β,polβ)的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达.方法 根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物(引物1、引物2),通过PCR扩增获得含BamHⅠ和ApaⅠ的基因序列,将其克隆入T载体,PCR及测序鉴定无误后,将其插入真核表达载体pcDNA4-C,从而构建了含突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ.将重组质粒以脂质体包裹的方式转染入polβ基因敲除的EC 9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.结果 经过PCR筛选及 DNA测序鉴定,证实真核表达载体pcDNA4-C-polβ构建成功.筛选后的EC 9706细胞经HislinkTM蛋白纯化试剂盒纯化,仅在39 kD位置有一条带,证明蛋白表达及纯化成功.结论 成功构建了食管癌突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,并纯化出polβ蛋白,为进一步研究polβ的功能奠定坚实的基础.

关键词：突变型DNA聚合酶β、pcDNA4-C真核表达载体、EC 9706细胞

所属期刊栏目：41

分类号：Q78;Q50

资助基金：漯河医学高等专科学校校级科研课题项目2009-LMC-305

在线出版日期：2012-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1716-1718