法国梧桐花粉变应原Pla a1基因的克隆与原核表达

摘要：

目的 克隆编码法国梧桐花粉主要变应原(Platanus acerifolia pollen allergen 1)的Pla a1基因,并构建原核表达载体进行表达.方法 采用RT-PCR法从法国梧桐花粉总RNA中扩增Pla a1基因全长cDNA以及不含信号肽的编码区,克隆至pMD18-T载体中进行测序.采用SalⅠ+SphⅠ双酶切,将不含信号肽的编码区定向亚克隆到pQE-30载体,形成原核表达载体pQE-30-Pla a1E,转化大肠杆菌M15菌株,PCR和酶切图谱鉴定为阳性的克隆子采用IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE电泳检测蛋白表达结果.结果 通过RT-PCR从法国梧桐花序总cDNA中扩增出了Pla a1基因的全长cDNA,与已报道序列基本一致,但发现该基因在非编码区存在SNP位点,尤其是在起始密码子ATG之前的Oligo A序列存在长度多态性.本研究还克隆了一条与Pla a1高度同源的新基因Pla a1′的大部分编码区序列.以基因组DNA为模板的对比克隆表明,该基因没有内含子.克隆子菌液PCR和质粒酶切图谱鉴定均表明,pQE-30-Pla a1E构建成功.IPTG诱导的含有pQE-30-Pla a1E的大肠杆菌M15菌液表达的具有6×His标签的PLA A1E蛋白,经SDS-PAGE电泳,显示了一条约16kd的条带.结论 发现了法国梧桐花粉主要变应原Pla a1基因的多态性位点,克隆了与其高度同源的另一条新基因Pla a1′的大部分编码区,成功构建了原核表达载体pQE-30-Pla a1E,并在大肠杆菌中获得高效表达,为获得重组纯化Pla a1变应原并用于花粉变应性疾病的诊治奠定了基础.

关键词：法国梧桐花粉、变应原、原核表达

所属期刊栏目：37

分类号：R593.1(全身性疾病)

资助基金：重庆市卫生局课题04-2-188

在线出版日期：2008-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1277-1279