顺铂通过ROS促进乙型肝炎病毒复制的实验研究
目的:探索顺铂(cisplatin)促进乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的分子机制.方法:采用不同浓度的顺铂处理稳定表达HBV的HepAD38细胞,台盼蓝染色检测细胞活力,筛选出顺铂最适浓度,分别采用Real-time PCR和Southern blot 检测HBV DNA水平,Western blot检测HBsAg和HBcAg蛋白表达.在顺铂诱导组加或者不加氧化应激抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC),采用CellROX Orange Reagent染料在激光共聚焦显微镜下检测细胞内ROS水平,并且检测HBV DNA水平、HBsAg及HBcAg的蛋白水平.结果:台盼蓝染色筛选出顺铂的最适浓度为6μmol/L.Real-time PCR实验结果显示,PBS组,0.5、2.0、6.0 μmol/L顺铂处理后HBV DNA拷贝数/细胞分别为515.152±18.924、1 215.758±49.001 (P=0.000)、1 678.182±117.223(P=0.000)、2 110.606±143.640(P=0.000);Southern blot结果与Real-time PCR结果一致,顺铂以剂量依赖方式增加HBV DNA水平.Western blot结果表明,与PBS组相比,6.0 μmol/L顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.102±0.099(P=0.000)、4.001±0.200(P=0.000);顺铂可以促进HBV复制和病毒蛋白的表达.进一步采用NAC与顺铂联合处理HepAD38细胞,Real-time PCR实验结果表明,顺铂组、顺铂+NAC组HBV DNA拷贝数/细胞分别为2 180.444±82.573(P=0.000)、1 041.778±50.918(P=0.000),2组差异具有统计学意义.Western blot实验结果表明,顺铂组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为3.139±0.061 (P=0.000)、3.812±0.109(P=0.000),顺铂+NAC组HBsAg、HBcAg蛋白相对表达量分别为2.101±0.088(P=0.000)、1.613±0.073(P=0.000),2组之间HBsAg、HBcAg蛋白差异均具有统计学意义.结论:顺铂通过增强细胞内ROS水平,促进HBV复制,而NAC可以部分抑制顺铂刺激的HBV复制作用.
顺铂、乙型肝炎病毒、病毒复制、活性氧、N-乙酰-L-半胱氨酸
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R5(内科学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;重庆市三百科技领军人才支持计划资助项目;创新团队建设项目;重庆市科委重点资助项目;重庆市研究生科研创新项目;拔尖人才计划
2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
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