线粒体损伤在脂多糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用
目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对血管内皮细胞凋亡的影响及线粒体损伤在其中的作用.方法:LPS刺激体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)后,采用CCK-8检测血管内皮细胞存活率,Western blot检测HUVECs细胞内Bax、Bcl-2、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)和Cleaved-caspase 3蛋白的表达,用流式细胞计数检测细胞的凋亡情况,用荧光探针Mitotracker、JC-1、Mito SOX染色检测细胞内线粒体形态及其膜电位的变化,以及线粒体来源活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平;用MitoTEMPOL+IPS干预细胞,检测Bax、Bcl-2、Cyt C蛋白表达以及凋亡.结果:LPS浓度依赖性降低细胞存活率(F=99.31,P=0.000).与对照组相比,LPS可以明显诱导HUVECs细胞凋亡(t=17.184,P=0.000),并呈浓度依赖性增加Cleaved-caspase 3 (F=13.52,P=0.001)、Cyt C (F=21.008,P=0.000)和Bax (F=16.325,P=0.000)蛋白表达,并减少Bcl-2(F=17.287,P=0.000)蛋白的表达.LPS刺激后HUVECs细胞内线粒体发生明显的片段化和颗粒状变、线粒体膜电位下降(F=92.286,P=0.000),线粒体来源的ROS产生明显增加(t=5.324,P=-0.006).采用线粒体ROS清除剂(MitoTEMPOL)处理,可抑制LPS刺激的HUVECs细胞Bax(F=19.854,P=0.002)和Cyt C(F=1 1.594,P=0.009)蛋白表达,增加Bcl-2(F=8.077,P=0.020)蛋白表达,同时降低Cleaved-caspase 3(F=15.941,P=0.004)蛋白表达和减少细胞凋亡(F=57.482,P=0.000).结论:LPS可以诱导HUVECs细胞凋亡和线粒体损伤,损伤线粒体所释放的ROS可能在LPS诱导的血管内皮细胞凋亡的过程中发挥了重要的作用.
脂多糖、血管内皮细胞、线粒体损伤、活性氧、凋亡
45
R515.3;R631.2(传染病)
国家自然科学基金81202318
2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1137-1143
