Mmp-2重组真核表达载体的构建及MMP-2蛋白对肝癌细胞的作用机制探讨
目的:构建人基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)基因重组真核表达载体,探讨 MMP-2蛋白对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:以肝癌 SMMC-7721细胞为研究模型,以基因重组技术构建 pEYFP-Mmp-2重组真核表达载体,pEYFP-Mmp-2一过性转染模型细胞过表达 MMP-2-YFP,siRNA转染沉默模型细胞内源性 MMP-2表达,设立空白对照、MMP-2沉默对照组、MMP-2沉默组、过表达 MMP-2融合蛋白对照组、过表达 MMP-2融合蛋白组,划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭小室实验检测细胞侵袭能力,钙蛋白酶(ca1cium-activated neutral protease,Calpain)特异d性抑制1剂 Calpeptin抑制Calpain活性,蛋白印记实验检测 MMP-2 、MMP-2-YFP、E-钙蒙古蛋白(E-cadherin)、N-钙蒙古蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vi-mentin)表达变化.结果:成功构建人Mmp-2重组真核表达载体pEYFP-Mmp-2.pEYFP-Mmp-2转染过表达 MMP-2融合蛋白组细胞高表达 MMP-2-YFP.与 MMP-2沉默对照组相比,MMP-2沉默组内源性 MMP-2表达明显下调(P=0.000),细胞 12 h、24 h及 48 h迁移率明显降低(P=0.000或 P=0.001),48 h侵袭率明显降低(P=0.004),E-cadherin表达明显上调,N-cadherin及Vimentin表达明显下调(P=0.000).与过表达 MMP-2融合蛋白对照组相比,过表达 MMP-2融合蛋白组 12人24 h及 48 h迁移率明显增强(P=0.015或 P=0.001),48 h侵袭率明显升高(P=0.011),细胞 E-cadherin表达明显下调,N-cadherin及 Vimentin表达明显上调(P=0.003或P=0.001).Calpeptin预处理明显降低过表达 MMP-2融合蛋白组细胞迁移率和侵袭率(P=0.000),上调E-cadherin,下调 N-cadherin及 Vimentin蛋白表达水平(P=0.000).结论:本实验通过基因重组技术成功构建人Mmp-2重组真核表达载体 pEYFP-Mmp-2,成功表达 MMP-2-YFP融合蛋白;并发现 MMP-2通过调节 Calpain介导肝癌 SMMC-7721细胞迁移、侵袭及 EMT.
肝细胞癌、基质金属蛋白酶2、迁移、侵袭、上皮-间质转化
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R329.2+5(人体形态学)
贵阳市科技计划;贵州省中医药管理局中医药;民族医药科学技术研究资助项目
2020-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1447-1453
