NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究
目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用.方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因.然后在HepG2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBVDNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况.结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80％,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000).NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50％(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92％(t=31.59,P=0.001).NR6A1N(NR6A 1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P＞0.05).NR6A 1C(NR6A 1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P＞0.05).结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子Ⅱ的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制.
乙肝病毒、核受体、生殖细胞核因子(NR6A1)、启动子、增强子
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Q786(基因工程（遗传工程）)
2019-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
289-295
