miR-335-5p通过靶向Oct4调控胃癌细胞的增殖
目的:研究微小(miR)-335-5p对胃癌细胞增殖的影响及其机制.方法:采用荧光定量PCR检测miR-335-5p在胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-28、MKN-45和人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平,利用miR-335-5p过表达慢病毒及封闭慢病毒分别感染SGC-7901和BGC-823细胞株,实验分为SGC-7901细胞中miR-335-5p组(转染过表达miR-335-5p组)和阴性对照组(空病毒组,NC),BGC-823细胞中antago-miR-335-5p组(转染封闭miR-335-5p慢病毒)和阴性对照组(空病毒组,NC).通过CCK-8实验、平板克隆实验、EdU实验检测miR-335-5p对细胞增殖的影响,用生物信息学软件预测miR-335-5p可能的靶基因,通过Western blot验证miR-335-5p对靶基因的调控作用并检测AKT及pAKT的表达.结果:miR-335-5p在胃癌细胞系中表达明显下降.CCK-8实验、平板克隆实验及EdU实验中过表达miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均低于其阴性对照组,而封闭miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均高于其阴性对照组.同时用生物信息学软件预测了Oct4作为miR-335-5p的靶基因,Western blot表明过表达miR-335-5p组Oct4的表达量(0.469±0.054)明显低于阴性对照组(0.670±0.045) (P=0.008),封闭miR-335-5p组Oct4的表达(0.804±0.046)高于阴性对照组(0.600±0.073)(P=0.015),同时双荧光素酶报告实验证明miR-335-5p能够靶向Oct4;过表达miR-335-5p组中pAKT的表达量(0.525±0.046)较阴性对照组(0.847±0.053)有所下降(P=0.001),封闭miR-335-5p组(0.841±0.069)中pAKT的表达量较阴性对照组(0.563±0.063)有所升高(P=0.007).结论:miR-335-5p可以通过靶向Oct4抑制AKT通路从而抑制胃癌细胞的增殖.
miR-335-5p、胃癌、细胞增殖、Oct4
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R735.2(肿瘤学)
国家临床重点专科建设资助项目”2012”649
2019-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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268-274
