利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Morn3基因敲除模型

摘要：

目的:采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的Morn3基因进行编辑,以期建立Morn3基因敲除斑马鱼模型.方法:针对斑马鱼Morn3基因用生物信息学选取靶位点,构建gRNA表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24～48 h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果.结果:取3个靶位点(M1、M2、M3)进行试验,选择gRNA浓度较高的M2和M3进行注射.限制性酶切及测序的结果显示M3已产生基因编辑效应.结论:本研究通过CRISPR/Cas9系统成功获得Morn3基因编辑的突变体,为进一步探讨Morn3基因的作用提供研究基础.

关键词：CRISPR/Cas9、Morn3、斑马鱼、基因编辑

所属期刊栏目：43

分类号：R698+.2(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;湖北省卫计委资助项目

在线出版日期：2019-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1449-1452