过表达Survivin通过调控缺氧血管内皮细胞EPAS1和CHOP-10表达影响细胞增殖、凋亡
目的:目的:研究过表达存活素(Survivin,SVV)基因对缺氧处理的大鼠血管内皮细胞增殖、迁移能力及内皮PAS1区域蛋白1 (endothelial PAS domain-containing protein 1,EPAS1)、C/EBP同源蛋白-10(C/EBP homologous protein-10,CHOP-10)蛋白表达的影响和机制.方法:用500 μmol/L氯化钴(CoCl2)缺氧处理大鼠动脉内皮细胞,并分为SVV干预组、阴性对照组、空白对照组.SVV干预组用腺病毒转染SVV-增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP),阴性对照组转染空病毒,空白对照组不作处理.对细胞进行Transwell实验检测细胞迁移能力变化,酵素免疫分析法(enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的含量变化,WST-1检测细胞增殖能力,流式细胞学检测细胞周期,Western blot分别检测SVV、EPAS1、CHOP-10、凋亡蛋白Caspase-8表达变化.用U0126和LY294002分别阻断EPAS1上游信号通路P44/42丝裂原活化蛋白激酶(P44/42 mitogen-activated protein kinase,P44/42 MAPK)和磷酸肌醇3-激酶/AKT(phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K/AKT)后,Western blot检测EPAS1表达,研究SVV影响EPAS1的机制.结果:过表达SVV能促进内皮细胞的细胞迁移能力,MMP-2、MMP-9分泌水平上升.转染SVV后细胞增殖能力增强,S期细胞增多,转染后SVV表达上升(F=326.137,P=0.000).过表达组EPAS1蛋白相对表达量为1.29±0.11,阴性对照组为0.97±0.06,空白表达组为0.99±0.06,SVV能上调EPAS1表达,且有统计学差异(F=17.765,P=0.000).过表达SVV能抑制CHOP-10表达,差异有统计学意义(F=78.908,P=0.000).过表达SVV后Caspase-8相对表达量明显减少(F=53.823,P=0.000).而阴性对照组和空白对照组的3种蛋白表达量无统计学差异(P=0.841,P=0.891,P=0.955).通过阻断P13K/AKT途径能抑制SVV引起的EPAS1表达上调”(0.78±0.04) vs.(1.32±0.28),P=0.002”,P42/44 MAPK通路阻断剂U0126作用后EPAS1表达减少无统计学差异”(1.36±0.12) vs.(1.32±0.28),P=0.451”.结论:缺氧条件下SVV过表达促进细胞增殖、促进MMP-2、MMP-9分泌和提高细胞迁移能力.SVV主要通过P13K/AKT途径上调内皮细胞EPAS1表达,并抑制CHOP-10和Caspase-8表达,从而保护细胞适应低氧环境,发挥抗凋亡作用和潜在促血管生成的功能.
存活素、增殖、迁移、缺氧
43
R654(外科学各论)
2019-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1437-1442
