糖基化终末产物对小鼠皮肤成纤维细胞衰老的影响
目的:建立糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠皮肤成纤维细胞(NCTC clone 929,L929)衰老模型,并探讨其相关生物学变化机制.方法:实验选用L929细胞株为实验对象,随机分为5组:空白对照组(L929+完全培养基)、实验组A(L929+0.05 g/L AGEs)、实验组B(L929+0.1 g/L AGEs)、实验组C(L929+0.2 g/L AGEs)、阳性对照组(L929+10g/LD-半乳糖).通过CCK-8检测24、48、72 h各组细胞增殖情况;作用48 h后检测β-半乳糖苷酶染色、细胞周期分析及衰老相关蛋白p16、CyclinD1表达水平验证L929衰老模型成立;活性氧和超氧化物歧化酶(superoxide dismutate,SOD)、丙二醛(mal-ondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)检测细胞内氧化应激水平.结果:CCK-8提示AGEs可抑制细胞增殖,刺激48 h细胞活力明显下降.与空白对照组相比,AGEs呈浓度梯度性增高β-半乳糖苷酶活性(B:24±3.4,C:43±10.0,均P=0.000)和G1期阻滞率(A:69.90±2.13,B:74.74±1.49,C:79.29±3.38,均P=0.000),p16蛋白表达上调(B:0.53±0.20,C:0.63±0.11,P=0.001,P=-0.000),CyclinD1蛋白表达下调(B:1.07土0.14,C:0.63土0.11,P=0.01,P=0.000),SOD及CAT活性降低(B:29.19±6.67,C:15.13±5.21,P=0.001,P=0.000;A:3.73±0.42,B:1.59±0.16,C:1.20±0.20,均P=0.000),MDA和活性氧水平增高(A:1.19±0.08,B:2.02±0.12,C:2.49±0.03,均P=0.000;A:1.49±0.04,B:1.81土0.34,C:1.92±0.04,P=0.006,P=0.000,P=0.000);与阳性对照组相比,实验组Aβ-半乳糖苷酶阳染细胞数和G1期细胞数降低[(12.0±3.6)vs.(45.0±8.2),P=0.004;(69.90±2.13) vs.(76.59±0.61),P=0.001],p16蛋白表达下调[(0.34±0.12) vs.(0.64±0.04),P=0.001],CyclinD1蛋白表达上调[(1.32±0.09) vs.(0.51±0.16),P=0.000],SOD及CAT活性增高[(39.53±4.24) vs.(27.09±6.25),P=0.018;(3.73±0.42) vs.(1.64±0.09),P=0.000],MDA和活性氧水平降低[(1.19±0.08) vs.(2.39±0.07),P=0.000;(1.47±0.04) vs.(1.84±0.09),P=0.020];上述实验结果提示实验组B、C与阳性对照组比较差异没有统计学意义(P＞0.05).结论:0.1 g/L和0.2 g/L AGEs作用48 h均可建立L929体外衰老模型,这可能与细胞发生氧化应激及胞内衰老相关蛋白p16、CyclinD1表达改变有关.
D-半乳糖、晚期糖基化终末产物、衰老、氧化应激
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R965.1(药理学)
重庆市卫生计生委中医药科技项目ZY20132123
2018-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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