基于CRISPR/Cas9系统构建ARID2基因敲除模型并探索其对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的:通过成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9,CRISPR/Cas9)系统在SK-Hep1肝癌细胞系中构建AT富集作用域2(AT-rich interaction domain 2,ARID2)基因敲除模型,并初步观察ARID2敲除对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法:设计并合成靶向ARID2的向导RNA(single guide RNA,sgRNA)寡核苷酸序列,长度为20 bp,构建到CRISPR表达载体上,转染HEK293T细胞包装慢病毒并筛选稳定细胞株,采用克隆形成、Transwell和划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力.结果:目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的LentiCRISPER-V2质粒载体中且测序正确;经Western blot鉴定ARID2敲除的细胞株筛选成功;ARID2基因敲除后,与亲本细胞系相比,其蛋白表达缺失;克隆形成实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6)培养至10d时克隆形成数为(125.600±5.131)个,亲本细胞株克隆形成数为(69.000±5.567)个(t=12.962,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)培养至8d时克隆形成数为(94.000±8.737)个,亲本细胞株克隆形成数为(67.000±5.292)个(t=4.635,P=0.010),差异有统计学意义.Transwell结果示ARID2敲除细胞株(1#6)在24 h的迁移细胞数为(180.000±5.542)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(90.400±5.031)个(t=20.731,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)在24 h的迁移细胞数为(138.600±5.749)个,亲本细胞组的迁移细胞数为(78.400±5.703)个(t=12.891,P=0.000),差异有统计学意义.划痕实验结果示ARID2敲除细胞株(1#6) 16 h划痕愈合度为(88.000±0.011)％,亲本细胞组划痕愈合度为(52.500±0.047)％(t=12.490,P=0.000);ARID2敲除细胞株(2#1)16 h划痕愈合度为(71.900±0.020)％,亲本细胞组划痕愈合度为(55.200±0.024)％(t=9.190,P=0.001),差异有统计学意义.结论:ARID2敲除可明显促进肝癌细胞的增殖和迁移能力,证实ARID2作为抑癌基因参与肝癌的发生和进程.ARID2敲除细胞模型为肝癌的深入研究提供新的手段.
AT富集作用域2、CRISPER/Cas9、SK-Hep1、增殖、迁移
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R735.7(肿瘤学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;重庆市科委基础与前沿重点资助项目;创新团队建设项目
2017-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
850-855
