GSTZ1重组腺病毒的构建及影响肝癌细胞迁移能力的研究
目的:构建人谷胱甘肽-S-转移酶Z1(glutathione S-transferase zeta 1,GSTZ1)重组腺病毒,并初步研究GSTZ1调控粘附连接信号通路(adhesion junction pathway)靶基因SMAD3、IGF1R等影响肝癌细胞的迁移能力.方法:PCR扩增GSTZ1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAdTrack-TO4,构建重组腺病毒质粒pAdTrack-GSTZ1,将重组质粒用Lipofectamine 2000转染至HEK293细胞中,包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdGSTZ1.首先,将SMMC-7721细胞设为3组:Mock组、AdGFP组和AdGSTZ1组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdGSTZ1组为感染腺病毒AdGSTZ1的实验组.然后,通过Transwell实验和MTS实验观察其对肝癌细胞迁移增殖能力的影响,进一步经qRT-PCR及Western blot技术研究GSTZ1通过调控粘附连接信号通路关键分子影响肝癌细胞的迁移.结果:成功构建了高滴度重组腺病毒AdGSTZ1,经Western blot鉴定GSTZ1在SMMC-7721细胞中的表达.Transwell实验结果表明,AdGSTZ1组与Mock组及AdGFP组相比,能够明显抑制人肝癌细胞的迁移能力;与Mock组相比,抑制率为(68.10±1.63)％(P=0.000),与AdGFP组相比,抑制率为(50.70±0.99)％ (P=0.000).MTS实验结果表明,AdGSTZ1组在72 h和96 h的吸光度值分别为(1.13±0.08)和(1.28±0.07),AdGFP组72 h和96 h的吸光度值分别为(1.28±0.03)和(1.45±0.03),AdGSTZ1组在96 h的吸光度值与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).另外qRT-PCR及Western blot结果显示,与Mock组和AdGFP组相比,AdGSTZ1感染细胞内粘附连接信号通路中靶基因SMAD3、IGF1R等的表达明显降低.qRT-PCR结果显示,AdGSTZ1组与AdGFP组相比,TGFBR1相对表达量为(0.58±0.13)(t=4.609,P=0.010),SMAD3相对表达量为(0.51±0.08) (t=8.030,P=0.000),ERBB2相对表达量为(0.46±0.09) (t=9.384,P=0.000),IGF1R相对表达量为(0.45±0.02) (t=14.480,P=0.000),FARP2相对表达量为(0.37±0.13) (t=7.082,P=0.028).Western blot表明,SMAD3组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.96士0.18),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.39±0.01) (P=0.001).IGF1R组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.97±0.05),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.44±0.02)(P=0.000).结论:GSTZ1通过调控粘附连接信号通路相关靶基因的表达抑制肝癌细胞的迁移.
GSTZ1、SMMC-7721细胞、粘附连接信号通路、肝癌、细胞迁移
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R73-3(肿瘤学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;重庆市科委基础与前沿重点资助项目;创新团队建设项目
2017-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
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