星形胶质瘤细胞GFAP的缺失对细胞周期相关蛋白的影响
目的:应用RNA干扰(RNAi)方法下调胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因表达,研究GFAP对星形胶质瘤细胞U251细胞增殖的影响及可能的作用机制.方法:采用小分子RNA干扰(Small interfering RNA,siRNA)技术特异性的干扰U251细胞中内源性GFAP的表达,并通过RT-PCR和Western blot技术检测U251细胞中GFAP的mRNA和蛋白表达水平,确定干扰效率.Western blot技术检测si-NC和si-GFAP转染48 h后,U251细胞中GFAP、CREB、cyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6、p15、p18、p27、Bax、Bcl-2和Caspase 3蛋白表达变化;MTT检测各组的细胞增殖情况.结果:(1)在U251细胞中特异性的抑制GFAP表达,抑制细胞增殖,降低细胞总RNA和总蛋白含量(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.962,P=-0.017;t=3.833,P=0.019).(2)在U251细胞中干扰GFAP表达,显著性抑制CREB(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.834,P=0.008)、cyclin D1(si-NC组vs.si-GFAP组:t=3.610,P=0.023)、CDK2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.678,P=0.003)和CDK4(si-NC组vs.si-GFAP组:t=4.530,P=0.011)的表达水平;并且显著性提高细胞周期依赖性激酶抑制因子pl8(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-3.339,P=0.029)和p27(si-NC组vs.si-GFAP组:t=13.859,P=0.000)的蛋白表达水平.(3)MTT检测结果显示24和48 h时si-GFAP组细胞生长速度明显低于si-NC组(si-NC组vs.si-GFAP组:t=6.389,P=0.000;t=6.058,P=0.000),差异有统计学意义.(4)在U251细胞中抑制GFAP表达,对凋亡相关蛋白Bax(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.657,P=0.547)、Bcl-2(si-NC组vs.si-GFAP组:t=-0.991,P=0.378)和Caspase 3 (si-NC组vs.si-GFAP组:t=-1.848,P=0.138)的表达无明显影响.结论:在U251细胞中抑制GFAP的表达,影响细胞周期相关蛋白的表达,从而抑制细胞的增殖.
调胶质纤维酸性蛋白、星形胶质瘤细胞、细胞周期、抑郁症
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R329.2+8;R749.99(人体形态学)
国家重点基础研究发展计划资助项目编号:2009CB008300.
2016-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1005-1010
