腺病毒介导人ATF6基因修饰对体外细胞增殖凋亡的实验研究

摘要：

目的:构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 siRNA,并探讨内质网应激(ER Stress,ERS)时其对人软骨肉瘤细胞SW1353增殖凋亡的影响.方法:将ATF6基因序列与靶向ATF6的siRNA序列分别克隆到pAdTrack-cmv和pSES-HUS穿梭质粒上,然后分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-ATF6和pAd-ATF6 siRNA,通过脂质体介导在HEK293细胞中进行包装和扩增.通过RT-PCR和Western blot检测病毒效果.流式细胞仪法(flow cytometry,FCM)、MTT法及Western blot检测ERS状态下ATF6对SW1353细胞增殖凋亡的影响.结果:成功获得了重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 siRNA.RT-PCR和Western blot结果表明,重组腺病毒能有效的感染细胞.FCM检测结果表明,ERS条件下,ATF6感染组S期细胞比例明显升高,凋亡率明显降低(仁0.000);Ad-ATF6 siRNA感染组S期细胞比例明显降低,凋亡率明显上升(P=0.000).MTT与Western blot实验结果与FCM结果一致.结论:ERS状态下,ATF6能促进SW1353细胞的增殖,抑制其凋亡.

关键词：活化转录因子6、重组腺病毒、SW1353细胞、增殖和凋亡

所属期刊栏目：40

分类号：R394.3

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;新世纪优秀人才支持计划;人社部留学回国人员科技活动择优资助项目

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1338-1343