PI3K/AKT信号通路在SK-N-SH细胞中对增殖和分化的影响
目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路在人神经母细胞瘤SK-N-SH (human neuroblastoma,SK-N-SH)细胞增殖和分化中的作用.方法:体外培养SK-N-SH细胞,取对数生长期细胞接种于96孔培养板,将培养板中的细胞分为A组抑制剂LY294002组、B组激动剂类胰岛素生长因子-1 (insulin-like growth factors-1,IGF-1)组、C组二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组(LY294002阴性对照组)、D组ddH2O组(IGF-1阴性对照组)和空白组E、F组(培养基组),24 h后A组加入不同浓度的抑制剂LY294002,终浓度为20、40、50、60、100 μmol/L,B组换用无血清DMEM继续培养12h后加入不同浓度激动剂IGF-1,终浓度为25、50、100、150、200 ng/ml,阴性对照组分别加入与LY294002和IGF-1相同浓度的DMSO和ddH2O,空白组为100 μl/孔培养基,置于37℃,5％CO2的孵箱中培养,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和激动剂IGF-1对SK-N-SH细胞增殖影响,倒置相差显微镜下观察细胞形态学分化改变,荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测SK-N-SH细胞TrkA mRNA的表达与变化.结果:①MTT检测结果显示,LY294002明显抑制SK-N-SH细胞生长,LY294002组(0.39±0.17)细胞增值能力较阴性对照DMSO组(0.78±0.21)减弱,差异有统计学意义(P=0.018).IGF-1促进SK-N-SH生长,IGF-1组(0.72±0.14)细胞增值能力较阴性对照组(ddH2O组,0.43±0.08)增值能力更强,差异有统计学意义(P=0.004).②显微镜下观察LY294002组和IGF-l组细胞无明显分化形态学改变.③FQ-PCR结果显示,LY294002组(0.78±0.05)酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase receptor A,TrkA)信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达与阴性对照组(1.56±0.02)、空白组(1.66±0.15)比较,组间差异有统计学意义(F=81.89,P=-0.000).IGF-1组、ddH2O阴性对照组和空白组3组间的TrkA mRNA的表达水平无统计学差异(F=0.27,P=0.770).结论:PI3K/AKT信号通路可能参与了SK-N-SH增殖和分化过程,该通路关键基因有望成为临床治疗神经母细胞瘤的分子靶点.
人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、增殖、分化
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R730(肿瘤学)
重庆市卫生局重点课题资助项目编号:20111069;国家临床重点专科建设经费资助项目编号:2013544.
2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1089-1094
