人肝再生增强因子真核表达及其对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响
目的:构建人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR) 15kD亚型的真核表达系统,并探索ALR对顺铂(Cisplatin,DDP)诱导的人肝癌细胞株QGY凋亡的影响.方法:用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法和基因重组技术,从重组质粒pPIC9K-rhALR中扩增出编码rhALR基因片段,将其克隆入pPICZαA质粒中构建重组质粒pPICZα-A-rhALR.重组质粒SacⅠ酶切线性化后电转入酵母GS115中,并在1％的甲醇诱导下表达.表达上清蛋白经Western blot(ALR多克隆抗体和His-tag标签抗体)鉴定和镍柱亲和层析纯化.MTS试剂检测rhALR体外对人肝癌细胞(HepG2、QGY)的促增殖活性,及流式细胞仪检测rhALR在顺铂诱导QGY细胞凋亡中的抗凋亡作用.结果:PCR、双酶切、DNA测序均鉴定重组质粒构建与预期一致.分泌表达的rhALR约占上清总蛋白的70％,目的分子量约17 kD,Western blot均可见单一条带.纯化后的rhALR对HepG2和QGY的体外促增殖作用呈浓度依赖性增强(HepG2组:F=246.729,P=0.000;QGY组:F=246.004,P=0.000),且在QGY细胞顺铂诱导凋亡时也发挥着浓度梯度式抗凋亡作用(F=101.061,P=0.000).结论:成功构建高效分泌表达rhALR的pPICZα-A-rhALR GS115真核表达系统;体外实验证实rhALR对顺铂诱导人肝癌细胞有呈浓度依赖性的抗凋亡作用.
肝再生增强因子、酵母表达、生物学活性、镍柱亲和层析
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R575(消化系及腹部疾病)
国家自然科学基金30971334
2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1065-1070
