肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制

摘要：

目的:构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA(shRNA),通过下调HepG-2肝癌细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞.②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的CD133干扰片段,重组载体pAd.Surp-shRNA972,pAd.SurpshRNA2377,pAd.Surp-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆.③Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.SurpshRNA485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组.感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力.结果:①成功构建了Survivin启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性.②成功包装Ad.SurpshRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485腺病毒.③RT-PCR和Western blot检别显示Ad.Surp-shRNA972、Ad.SurpshRNA2377,有封闭CD133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)％、(56.98±0.03)％;Ad.Surp-shRNA972、Ad.Surp-shRNA2377、Ad.Surp-shRNA485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.40)％、(48.65±0.20)％、(34.67±0.40)％;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,Ad.Surp-shRNA972组生长抑制率为(72.88±0.74)％,Ad.Surp-shRNA2377组生长抑制率为(59.90±0.87)％,Ad.Surp-shRNA485组生长抑制率为(30.18±0.95)％.结论:肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显著下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力.

关键词：Survivin、CD133、小发夹RNA、肝癌

所属期刊栏目：38

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81171365

在线出版日期：2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1419-1424