人外周血滤泡辅助T细胞的分选鉴定与功能检测

摘要：

目的:探索分选、鉴定和检测人外周血滤泡辅助T细胞(T follicular helper cells,Tfh)功能的方法.方法:使用密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)、免疫磁珠分选(magnetic-activated cell sorting,MACS)和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分选法来分选人外周血Tfh细胞,分选后使用FCM检测细胞纯度和活性,实时荧光定量PCR检测细胞群的特异性转录因子B细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma,Bcl)-6 mRNA的表达,激光共聚焦显微镜观察细胞形态和表面分子CD4、CXCR5的表达及定位,鉴定后使用FCM进行功能检测.结果:①FCM检测经分选后Tfh细胞纯度达(87.69±5.01)％,活性达(98.21±0.85)％,纯度和分选前有显著提高(P＜0.05).②实时定量PCR检测分选后的Tfh细胞群的Bcl-6 mRNA相对表达量显著高于分选前(P＜0.05),分选后的Tfh细胞群具有高纯度.③激光共聚焦显微镜观察到分选后的Tfh细胞形态完整,CD4及CXCR5的荧光表达于细胞膜并可以融合.④FCM可检测分选鉴定后Tfh细胞功能相关的表面分子PD-1、ICOS、CD40L的表达.结论:采用DGC+MACS+FCM,经鉴定可以得到纯度高、活性好的Tfh细胞,并可以开展其功能检测.

关键词：滤泡辅助T细胞、细胞分选、细胞鉴定、细胞功能检测

所属期刊栏目：38

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目0318,30930082;国家科技重大专项资助项目2008ZX10002-006、2012ZX10002007;重庆市科委资助项目CSTC2012gg-yyjsB10007

在线出版日期：2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1405-1409