体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

摘要：

目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法.方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoR Ⅰ酶切,然后用Southern blot 检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响.结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多.结论:成功建立了体外培养细胞内HBVcccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA.

关键词：乙型肝炎病毒、共价闭合环状DNA、Southern blot

所属期刊栏目：38

分类号：R373.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81000732;重庆市自然科学基金资助项目cstc2011jjA10005

在线出版日期：2014-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1393-1397