人源甲状腺髓样癌噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

摘要：

目的:应用噬菌体抗体展示技术,构建大容量天然人源甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)噬菌体单链抗体库.方法:提取MTC病人癌周淋巴结总RNA,通过RT-PCR方法获得抗体可变区基因VH和VL基因片断,以它们为模板分别扩增VH-Linker和VL-Linker,再用剪切重叠延伸PCR技术将之拼接组装成单链抗体可变区基因片段(single chain fragment variable,scFv)后引入酶切位点SfiⅠ和NotⅠ.将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E后经电转入大肠杆菌Ecoli TG1,之后经辅助噬菌体M 13K07超感染,构建人源MTC噬菌体单链抗体库.PCR鉴定scFv片段阳性插入率,1.0％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物.结果:MTC周围淋巴结总RNA的琼脂糖电泳结果可见清晰的28 S、18S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp.用pUC19标准质粒测定转化效率达到108 cfu/μg,scFv的阳性插入率为87.5％(21/24).结论:成功地构建了人源MTC噬菌体展示文库,为进一步筛选具有MTC细胞特异性的人源噬菌体单链抗体奠定了实验基础.

关键词：噬菌体展示技术、噬菌体单链抗体、甲状腺髓样癌、构建

所属期刊栏目：38

分类号：R581.9(内分泌腺疾病及代谢病)

在线出版日期：2013-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1040-1043