HBV-S基因四环素调控双表达载体的构建及其调控表达研究
目的:构建在同一载体中含乙肝病毒表面抗原基因(Hepatitis B virus surface gene,HBV-S)和四环素阻抑蛋白基因的双表达载体,研究在真核细胞中四环素对S基因表达的调控.方法:在双表达载体pVITRO3一个启动子后的多克隆位点插入四环素阻抑蛋白基因,用含四环素操纵子的启动子取代另一个启动子,并在其多克隆位点插入S基因,在同一载体中构建成S基因的四环素调控表达系统.用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,潮霉素400μg/ml进行抗性筛选,20 d形成抗性克隆,建立在四环素诱导下能稳定表达S基因的细胞系.以不同浓度的四环素(0.5、1.0、2.0、3.0 μg/ml)进行诱导,用逆转录PCR和微粒子酶免疫分析法检测S抗原的表达,以确定四环素的最佳浓度.结果:转染了重组质粒的HepG2细胞,在无四环素环境下,表达HBsAg水平极低,72 h时S/N值平均为1.57,在不同浓度的四环素诱导下,HBsAg表达量明显增加,72 h时S/N平均值分别为4.24、4.23、4.18、4.20,未发现与四环素的浓度之间有剂量关系.结论:成功构建了在同一质粒中表达HBV-S基因和四环素阻抑蛋白基因的双表达调控载体,在不同浓度四环素诱导下均有HBsAg表达,并随时间延长而表达量增高,但在同一时间点无明显差异.
乙肝病毒、四环素、调控表达
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R512.6+2(传染病)
国家自然科学基金资助项目30100158;重庆市渝中区科委基金资助项目2007-2009;重庆市科委自然科学基金计划资助项目CATC.2009BB5063;重庆市教委基金资助项目KJ070317
2011-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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