LMP-1与LMP-3真核双表达质粒的构建及体外表达
目的:构建真核双表达质粒pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3,并检测其在体外的表达.方法:采用人工设计合成人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)和LIM矿化蛋白-3(LIM mineralization protein-3,LMP-3)基因片段,分别连接于中介质粒Puc57,经酶切、测序鉴定后,LMP-1和pBudCE4.1先连接,经酶切鉴定,再连接LMP-3,重组双表达质粒行酶切、测序鉴定.用脂质体包裹转染骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),按转染情况分为5组:未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染LMP-1基因组(C组)、转染LMP-3基因组(D组)、转染LMP-1和IMP-3双基因组(E组).采用RT-PCR和Western blot检测LMP-1和LMP-3的表达.结果:酶切及测序证实质粒Puc57-LMP-1、Puc57-LMP-3及其pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3真核双表达质粒构建成功.该双表达质粒在体外转染骨髓MSCs后可表达LMP-1和LMP-3分子.对RT-PCR及Western blot检测结果行灰度值测量显示:LMP-1 mRNA及蛋白水平的表达,A、B组与C、D、E组间差异有统计学意义(P<O.05),C组与E组差异无统计学意义(P>0.05);LMP-3 mRNA及蛋白水平的表达,A、B组与C、D、E组间差异有统计学意义(P<0.001),D组与E组差异有统计学意义(P<0.05),C组及D组在LMP-1及LMP-3的表达上的差异无统计学意义(P>0.05).结论:成功构建真核双表达质粒pBudCE4.1-LMP-1-LMP-3,证实转染的骨髓MSCs能在体外同时表达LMP-1和-LMP-3分子.
LIM矿化蛋白-1、LIM矿化蛋白-3、质粒Puc57、质粒pBudCE4.1、间充质干细胞
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R683.42(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
2010-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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