RNA干扰联合Cre-loxP系统建立小鼠巨噬细胞RAW264.7 GR表达抑制模型
目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)及Cre-loxP系统构建针对目的基因糖皮质激素受体(Glueocorticoid receptor,GR)表达抑制细胞模型.方法:设计并合成两对RNAi靶序列,连接至pBS/U6-Neo载体,联合应用Cre-loxP系统及RNAi构建针对目的基因GR的两对重组质粒,对构建的重组质粒采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)及测序的方法进行鉴定,将构建成功的重组质粒及Cre-ERT2质粒稳定共转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用半定量逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot的方法分别检测诱导RNAi表达后GR在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:构建的两个针对目的基因GR的重组质粒可显著降低GR在mRNA及蛋白水平的表达.结论:联合采用RNAi及Cre-loxP系统能可控的稳定降低小鼠巨噬细胞RAW264.7中的GR表达.
糖皮质激素受体(GR)、RNA干扰、Cre-loxP系统
35
R363.2(病理学)
国家自然科学基金资助项目30472119
2010-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
1217-1220
