靶向CGI-100基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建靶向CGI-100基因的RNAi表达载体并鉴定其抑制效率.方法:设计及化学合成3对靶向CGI-100基因的短发央结构寡核苷酸,经退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切的PGenesil-1质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒,用脂质体2000转染到K562细胞中进行表达,经RT-PCR和斑点杂交检测转染前后CGI-100基因表达的变化.结果:经DNA测序证实3对靶向CGI-100基因的RNA干扰表达载体PGenesil-1-CGI-100构建成功,其中第1对PGenesil-1-CGI-100在mRNA水平抑制白血病K562细胞中CGI-100基因表达的效率最高,达54%.结论:成功构建针对CGI-100基因的RNA干扰的表达载体,并筛选出1对抑制效率较高的重组干扰载体,为进一步研究K562细胞中CGI-100基因的功能奠定基础.

关键词：CGI-100基因、RNA干扰、shRNA、K562细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R733.7(肿瘤学)

在线出版日期：2009-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1418-1422