10.3969/j.issn.0253-3626.2003.01.002
结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达
目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达.方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆入pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体.结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa 左右重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42%,用Western blotting证实其有良好的抗原性.经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92%的重组蛋白.结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础.
结核分枝杆菌、esat6基因、重组ESAT6
28
R378.91+1;Q753(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
重庆市卫生局资助项目00-1006
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
4-7
