葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库构建

摘要：

葱蝇具有兼性滞育的特性且与果蝇近缘,是昆虫滞育分子机理和冬滞育和夏滞育专化基因比较研究的理想模式种,本研究目的在于构建葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库,为进一步的滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础.利用RNAiso试剂提取葱蝇非滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,将限制性内切酶SfiⅠ消化后的cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB,转化入大肠杆菌(DH10B),获得原始文库.经过涂平板测定表明,原始文库的库容量为2.3×107个单克隆;随机挑取15个单克隆,通过PCR快速鉴定,插入片段大小在0.4～1.2 kb之间,平均大小在0.9 kb, 重组率达100%.这些结果表明本研究所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的基因的分离筛选和克隆表达的建库要求.

关键词：葱蝇、非滞育蛹、全长cDNA文库、SMART技术

所属期刊栏目：27

分类号：Q966(昆虫学)

资助基金：国家自然科学基金30870340;重庆市自然科学基金CSTC2008BB1365;重庆市自然科学基金重点项目CSTC2008BA5030

在线出版日期：2010-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：21-25