从寄主昆虫血淋巴中分离纯化病原真菌菌体的方法

摘要：

采用正交实验方法,对东亚飞蝗(Locusta migratoria)血细胞裂解及其DNA和RNA降解的条件进行了优化.在优化条件下,不仅去除了感病东亚飞蝗血淋巴中的血细胞及DNA和RNA,而且成功地分离和纯化了绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌体.裂解血细胞及其DNA和RNA的最佳酶解条件为:蛋白酶K的浓度为1 mg/mL,作用温度为26℃,时间为60 min,脱氧核糖核酸酶(DNAase Ⅰ)的用量为5U,核糖核酸酶(RNAase A)的浓度为0.5 mg/mL,作用时间为35 min,作用温度为30℃.以蝗虫特异引物进行PCR及RT-PCR检测结果表明,从绿僵菌侵染后的蝗虫血淋巴中分离纯化无蝗虫DNA和RNA污染的绿僵菌菌体,为后续分离和克隆绿僵菌侵入蝗虫体内后表达的基因,研究它们在致病机理中的作用奠定了基础.

关键词：绿僵菌、东亚飞蝗、血淋巴、正交实验

所属期刊栏目：29

分类号：Q26(细胞生物化学)

资助基金：教育部跨世纪优秀人才培养计划NCET-04-85

在线出版日期：2006-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：109-113,117