P物质融合毒素的质粒构建及其原核表达

摘要：

目的 构建pET-CTR-PS重组原核表达质粒,原核表达Cholix Toxin的毒性部位和P物质的融合蛋白,为探讨该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向杀伤作用奠定基础.方法 用PCR方法扩增Cholix Toxin的催化活性部分CTR,扩增后连入T载体构建T-CTR质粒.人工合成P物质双链寡核苷酸,将其插入pET32a中得到重组质粒pET-PS.将T-CTR和pET-PS分别经EcoRI和SacI双酶切后相接,构建得到重组质粒pET-CTR-PS.将测序正确的pET-CTR-PS重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白,用12% SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定重组蛋白CTR-PS的表达.结果 测序表明,CTR-PS 序列与预期一致.SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在18 ℃经0.02 mmol/L IPTG 诱导20 h后,获得高效表达,Western-blot鉴定正确.结论 本研究成功构建了pET-CT R-PS原核表达重组子,并获得了可溶性高表达.

关键词：原核表达、融合蛋白、大肠杆菌、质粒构建

所属期刊栏目：13

分类号：R398.2

资助基金：四川省教育厅科研项目;大学生创新创业训练计划项目;大学生创新创业训练计划项目;大学生创新创业训练计划项目;成都医学院项目

在线出版日期：2018-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：27-31