人肝再生增强因子基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建携带人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因的慢病毒表达载体,并验证其安全性与有效性.方法 将以人胎肝cDNA为模板扩增得到的ALR与pLenti6/V5-D-TOPO重组慢病毒载体连接后,与慢病毒包装体系ViraPowerTM Packaging Mix共转染293T细胞,得到携带人ALR基因的慢病毒表达载体病毒颗粒,实时定量PCR法测定病毒滴度;转染BLR 3A大鼠肝细胞,观察细胞生长情况,并用RT-PCR法测定ALR基因表达的方法,验证构建的慢病毒载体的安全性与有效性.结果 扩增产物凝胶电泳、提抽质粒酶切电泳及基因测序结果均显示成功构建携带ALR基因的慢病毒表达载体,测得其病毒滴度为1.48×107 v.p./mL.转染BLR 3A大鼠肝细胞72 h后,仅少量细胞病变脱离,转染率为88.49％;RT-PCR结果显示,构建的携带ALR慢病毒表达载体可诱导BLR 3A大鼠肝细胞表达ALR基因.结论 慢病毒表达载体是一种兼具有效性与安全性,且适用于基因研究的病毒表达载体.

关键词：肝再生增强因子、慢病毒表达载体、BLR 3A大鼠肝细胞、基因重组技术

所属期刊栏目：10

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国高等学校医学期刊临床专项No:11523021

在线出版日期：2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：393-396,409