表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒的构建

摘要：

目的 构建1个含有luxS基因上、下游片段、抗卡那霉素基因的重组克隆质粒,用以敲除表皮葡萄球菌luxS基因.方法 检索GenBank获得luxS基因序列以设计引物,以生物膜阳性表皮葡萄球菌基因组DNA为模板,采用高保真PCR扩增得到包含luxS基因上游片段、完整的luxS基因和luxS基因下游片段的长片段DN A;以pEASY-T4质粒为模板扩增得到抗卡那霉素基因,再用内侧引物分别扩增luxS基因上、下游序列,按luxS基因上游片段+抗卡那霉素基因+luxS基因下游片段的顺序重组连接,转化JM109感受态细胞,通过卡那霉素筛选、酶切分析和PCR-测序验证luxS基因敲除的重组克隆载体.结果 经酶切后电泳验证重组质粒中各目的片段插入无误,PCR检测结果证明重组质粒luxS基因缺失,测序结果显示碱基无错配,含目的基因的重组质粒菌株在含卡那霉素培养平板内正常生长,证明插入的抗卡那霉素基因表达良好.结论 表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒构建成功,为后续luxS基因缺陷株的构建奠定了基础.

关键词：表皮葡萄球菌、luxS基因、生物膜

所属期刊栏目：8

分类号：R780.2(口腔科学)

资助基金：四川省教育厅重点项目10ZA084

在线出版日期：2013-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：45-48