重组人Importin α的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

摘要：

目的 重组表达人细胞核输入蛋白α(Importin α),制备多克隆抗体.方法 提取人肝癌细胞HepG2中的总RNA,RT-PCR法扩增Importin α 基因.构建pGEX-6P-1-Importin α 融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST-Importin α 重组蛋白,经谷胱甘肽亲和层析纯化,然后免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA 检测抗体效价.结果 RT-PCR扩增出的Importin α 基因片段(1300bp)与理论大小一致.SDSPAGE和蛋白质印迹分析纯化GST-Importin α 重组蛋白相对分子质量为83kD,与质谱分析的相对分子质量结果相符.重组蛋白免疫小鼠后收获抗血清,ELISA显示抗体效价高.结论 在大肠埃希菌中成功表达并纯化Importin α 蛋白,获得多克隆抗体,为进一步研究输入系统及其应用打下基础.

关键词：核输入蛋白α、原核表达、蛋白质纯化、抗体制备

所属期刊栏目：5

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：成都医学院大学生创新实验项目CX200918

在线出版日期：2011-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：242-246