补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR条件优化

摘要：

目的 对补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR反应体系及扩增程序进行优化,检测PCR优化体系的适用性和灵敏性.方法 通过改进引物设计、改变PCR反应过程中Mg2+浓度、引物浓度、退火温度、模板DNA浓度及反应循环次数,分析比较PCR扩增效果.结果 优化后的补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR反应体系中,Mg2+浓度在2-4 mmol/L,引物浓度在0.025-0.4 μmol/L,循环次数在30-45次之间均能扩增得到清晰均一的特异性条带;同时,引物退火温度在55.5℃-69.6℃范围内均适用;优化后PCR体系能够检测的最低DNA浓度为1.41 ng/μl,即模板DNA在反应体系中的总量为约2.82 ng.结论 已经建立的优化后的PCR基因扩增体系特异性高且稳定可靠.

关键词：基因敲除小鼠、基因型鉴定、PCR条件优化

所属期刊栏目：5

分类号：R332(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金30772771

在线出版日期：2011-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：228-232