日本结缕草衰老叶片全长cDNA文库构建及酵母单杂交筛选验证

摘要：

脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿期延缓衰老提供理论依据.本研究利用Clontech的SMRT cDNA合成技术构建一个日本结缕草衰老叶片的高质量全长cDNA文库,其滴度为2.0×106 cfu·mL-1,插入片段平均长度大于1 kb,cDNA片段插入重组率为100％.该文库的完整性较高,可涵盖绝大多数基因信息,为酵母单杂交筛选奠定了基础.利用酵母单杂交技术,筛选到可与ZjPPH1基因启动子片段结合的候选菌落42个,并对20个候选基因进行测序和生物信息学分析,初步筛选到6个参与细胞生长和衰老过程的重要候选基因,为进一步探索Zj PPH1基因在日本结缕草衰老和叶绿素降解中的上游调控机制提供了理论支撑.

关键词：日本结缕草、全长cDNA文库、酵母单杂交、脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶基因

所属期刊栏目：27

分类号：S543.9(饲料作物、牧草)

资助基金：国家自然科学青年基金31901397;北京市农林科学院科技创新能力建设专项KJCX20180101 ,20180706;北京市科技计划项目.171100007217001

在线出版日期：2020-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1486-1493