燕麦镰孢菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立与应用

摘要：

为了明确燕麦镰孢菌(Fusarium avenaceum)快速检测方法,以荧光染料SYBR GreenⅠ为指示剂,以燕麦镰孢菌(F.avenaceum)的ITS序列为目的DNA片段,应用LAMP设计软件设计4条引物,优化LAMP反应体系和反应条件,用2％琼脂糖凝胶电泳和LAMP反应液颜色变化进行特异性和灵敏度验证,同时进行田间发病组织检测和土壤燕麦镰孢菌灵敏度验证.结果表明:优化的LAMP反应体系,最佳反应温度为65℃,反应程序为65℃下1h,80℃下20 min.特异性检测结果表明,燕麦镰孢菌LAMP检测均呈黄绿色(阳性),对照和其他病原菌均呈橘色(阴性).灵敏度验证结果表明,LAMP反应液检测灵敏度在DNA水平达到10 pg·μL-1,每克土壤中检测的灵敏度为40个燕麦镰孢菌孢子.对采自甘肃省甘南州卓尼县和临潭县的20份疑似病害样本提取的DNA进行检测,其中13份为阳性,表明该技术能够有效的检测出青稞发病组织中的燕麦镰孢菌.本方法的建立与应用能为燕麦镰孢菌的检测及其青稞茎基腐病的诊断提供一种新技术.

关键词：青稞、茎基腐病、燕麦镰孢菌、环介导等温扩增(LAMP)

所属期刊栏目：26

分类号：S543(饲料作物、牧草)

资助基金：国家公益性行业专项“作物根腐病综合治理技术方案”201503112;国家重点研发计划“特色经济作物化肥农药减施技术集成研究与示范”2018YFD0201100;甘肃省农业科学院科研条件建设及成果转化项目2017GAAS73

在线出版日期：2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1004-1010