Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

摘要：

利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入"甘农1号"杂花苜蓿(Medicago sativa Martyn)和"甘农3号"紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种"甘农1号"和"甘农3号"中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率.结果表明:75 mg·L-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300 mg·L-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD600值为0.4～0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10 min;经预培养3～4 d的材料侵染后再共培养3 d之后,在愈伤组织诱导培养基MS+2,4-D 2.0 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+0.6%琼脂+2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;"甘农1号"和"甘农3号"的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%.

关键词：苜蓿、溶菌酶Lyz基因、绿色荧光蛋白GFP基因、愈伤组织、农杆菌介导

所属期刊栏目：18

分类号：Q786;Q814.9(基因工程（遗传工程）)

资助基金：甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2007-03;国家科技支撑计划2006BAD04A04-01-08

在线出版日期：2010-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：352-357