杂花苜蓿SRAP-PCR反应体系的正交优化

摘要：

利用正交设计L16(45)对杂花苜蓿(Medicago varia Martin.)SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,旨在建立一套适用于苜蓿属(Medicago L.)种质资源的SRAP标记技术体系.结果表明:各因素对PCR反应结果都有显著影响,由F值可知,dNTP的量对反应结果影响最大,其次是Taq酶的量,模版DNA浓度的影响最小,各因素水平的变化对PCR反应的影响依次为:dNTP>Taq酶>Mg2+>引物>模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立杂花苜蓿SRAP-PCR反应的最佳体系(25 μL )为:dNTP 2 μL( 0.20 mmol·L-1),Taq DNA 聚合酶0.3 μL (1.50 U), Mg2+3 μL(1.50 mmol·L-1),上、下游引物各1 μL (0.40 μmol·L-1),50 ng模板DNA1 μL,10×PCR buffer 2.5 μL (不含Mg2+).这一优化体系的建立,为今后利用SRAP标记技术进行苜蓿属植物遗传图谱构建、遗传多样性分析及种质资源鉴定等研究奠定了技术基础.

关键词：杂花苜蓿、SRAP、PCR、正交设计、优化

所属期刊栏目：18

分类号：Q943(植物学)

资助基金："863"计划项目2008AA10Z149;国家科技支撑项目2008BADB3B2006BAD01A19

在线出版日期：2010-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：345-351