紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa L.)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序.在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4 μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2 μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2,2.5%去离子甲酰胺.PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃～58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃;94℃变性30 s,52℃(52℃～48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温.

关键词：紫花苜蓿、ISSR、PCR反应体系、优化

所属期刊栏目：15

分类号：S812;Q943(普通畜牧学)

资助基金：国家自然科学基金30471230

在线出版日期：2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：212-215