tRNA-sgRNA/Cas9系统介导多年生黑麦草原生质体的基因编辑

摘要：

tRNA可以将多个sgRNAs连接起来合并成一个多顺反子基因,再与CRISPR/Cas9表达载体结合形成多顺反子tRNA-sgRNA/Cas9(PTG/Cas9)系统来对多靶点进行基因编辑.该系统已经在水稻中验证其可促进sgRNAs的转录和提高多靶点的编辑效率.因此,为了在多年生黑麦草中实现高效的基因编辑,本研究中,构建了2个带有tRNA的CRISPR中间载体,并提供了一种快速、灵活的PTG/Cas9载体构建方法.为了快速验证PTG/Cas9系统是否可以在多年生黑麦草基因组中发挥功能,用聚乙二醇4000(PEG 4000)介导PTG/Cas9质粒转化多年生黑麦草原生质体,后提取原生质体DNA扩增目的序列检测是否有目标基因被编辑的细胞.试验结果显示,PTG/Cas9系统可用于多年生黑麦草基因编辑,且基因编辑效率约为6.7％.试验结果为多年生黑麦草遗传研究和育种提供了重要的基础.

关键词：CRISPR/Cas9、tRNA、多基因编辑、载体、质粒、原生质体、多年生黑麦草

所属期刊栏目：32

分类号：Q78;R9;R378

资助基金：国家自然科学基金31971757

在线出版日期：2023-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：129-141